POCT的基本原理是把傳統分析儀器微型化,操作方法簡單化,使之成為便攜式和手掌式的設備。應用實時快速熒光定量PCR技術及核酸快速釋放技術,通過擴增產物的熒光信號的變化實現對病毒核酸的監測。同時,還可以實現在一個反應體系下檢測多種病原體,方便快捷,在臨床醫療、健康管理、軍事管理、生物應急、動物衛生等場合均有廣泛的應用。POCT技術平臺在分子診斷的基礎上融入POCT快速的優勢,進行呼吸道系列產品的研發工作。
POCT 產品具有三個方面的鮮明特色:
1. 檢測時間:POCT產品縮短了從樣本采集、檢測到結果報告的檢測周期;
2. 檢測空間:POCT 屬于在被檢測對象身邊的檢測;
3. 檢測的操作者:POCT 的操作者可以是非專業檢驗師,甚至是被檢測對象本人。
PCR-反向點雜交法技術是采用PCR體外擴增和DNA反向點雜交相結合的基因檢測技術。該技術采用生物素標記的引物進行靶序列的擴增,將擴增產物同固定在膜條上的特異性探針進行雜交,一次雜交反應可同時檢測多種靶序列。廣泛應用于病原體檢測、基因突變檢測、基因分型及遺傳多態性檢測等方面,具有潛在的臨床應用價值。其技術原理如下圖所示。反向點雜交法技術平臺開發的人乳頭瘤病毒基因分型(25型)檢測試劑盒(PCR-反向點雜交法)可以針對女性宮頸脫落上皮細胞樣本中的25種HPV進行檢測和分型。
技術特點:
該技術具有快速、簡便、高靈敏度的特點,同一反應管可以檢測多種靶標片段,在病原體檢測、基因突變檢測、基因分型及遺傳多態性檢測中具有顯著的優勢。
特異性高。擴增產物同探針結合具有高特異性。
適用范圍廣。廣泛應用于病原體檢測、基因突變檢測、基因分型及遺傳多態性等多個領域,具有潛在的臨床應用價值。
操作簡單。反應液為預分裝試劑,直接加入模板就可進行擴增。
基因甲基化是遺傳表觀學的重要組成部分。甲基化修飾異常是腫瘤發生過程中的早期事件,是細胞的遺傳本質和外界環境影響共同作用的結果?;虻膯幼訁^域發生甲基化修飾后,往往使得該基因的表達下調,隨之影響了細胞內一系列的分子事件,最終導致細胞發生癌變,圖1為宮頸癌變過程。利用分子診斷方法對腫瘤DNA甲基化程度進行測定,可以輔助診斷腫瘤及判斷預后,對腫瘤的篩查和風險評估、早期診斷、預后診斷及治療檢測具有重要的意義。
金迪安分子研發團隊針對已有的HPV和TCT產線布局,利用新建的甲基化技術平臺開發宮頸癌甲基化檢測產品。圖2為金迪安團隊開發的宮頸癌甲基化檢測產品實驗操作流程為:標本采集/暫存→脫落細胞gDNA提取→DNA濃度檢測→亞硫酸鹽化學轉化→bisDNA純化→熒光PCR反應→結果判讀。
探針熔解曲線技術是通過實時監測溫度變化過程中探針的熒光強度變化情況,從而得到熒光強度隨溫度變化的曲線,然后通過對熒光強度隨溫度的變化進行轉換,得到直觀的探針熔解曲線峰圖。熒光探針與不同靶序列雜交,形成的雙鏈雜交體的穩定性也不同,故具有不同的Tm值。其技術流程如下圖1所示。探針熔解曲線技術平臺針對藥物代謝基因、人類白細胞抗原基因以及HPV感染進行檢測,在SNP檢測、基因多態性分型以及HPV高低危分型等方面有廣泛應用。
技術特點:
檢測通量高。同一反應管可檢測十幾種甚至更多靶標片段,在病原體分型檢測、多重耐藥基因檢測、用藥指導基因篩查等方面具有顯著優勢。
對SNP位點識別特異性高??梢苑直娉霭行蛄泻蜔晒馓结樒ヅ涑潭?對SNP位點就有高的檢測特異性。
適用范圍廣??稍谠谀[瘤、遺傳和微生物等多個領域中進行應用。
成本低廉。在檢測相同數量靶序列的情況下熒光探針熔解曲線技術所需的熒光探針數量遠少于傳統實時熒光PCR技術。